動物源性食品中3類抗生素類藥物（wù）殘留檢測

摘（zhāi）要：建立了利用固相萃取方法和高效液相色譜法檢測豬肌肉中土黴素、甲碸（fēng）黴素、磺胺（àn）甲氧噠嗪的殘留（liú）的方法。固相萃取（qǔ）技術能快速有效（xiào）的提取動物源性食品中的抗生素殘留（liú）。建立的高效（xiào）液相色譜法在5~1000μg/L範圍內線性良好(R＞0.999)，土黴素、甲碸黴素、磺胺甲氧噠嗪的平均回收率分別為78.6%~86.2%,77.8%~100.5%,84.2%~91.3%,相對標準偏差(RSDs)均小於7%。本方（fāng）法可用於（yú）動物源性食品中抗生素類（lèi）藥（yào）物殘留的測定。

抗生素類藥（yào）物殘（cán）留對人體有巨大的危害，會擾亂人體的微生態，導致菌群失調、細菌產生耐藥性、產生過敏反應、毒性作用、產（chǎn）生致畸、致癌、致突變的反應等。土黴素屬於四環素類抗生（shēng）素，對多種病原（yuán）菌有較強的抑（yì）製作（zuò）用，廣泛應用在獸藥和飼料（liào）添加劑方麵。土黴（méi）素（sù）殘留對（duì）胃腸肝髒有很大的損害，長（zhǎng）期低濃度的藥物殘留還會誘發病菌的（de）耐藥（yào）性。磺胺甲氧噠嗪是一種含有對氨基苯磺酰胺結構的人（rén）工合成抗菌藥，常用（yòng）於畜禽（qín）預（yù）防和治療細菌感（gǎn）染性疾病，但如果（guǒ）在養殖環節中超量使用，可直接或間接（jiē）地通過環境和食物鏈的傳遞，產生耐藥細菌，危害人體健康。甲碸黴素屬於氯黴素類（lèi）藥（yào）物，主要通過抑製細菌蛋白質的合成和抑製（zhì）抗體的（de）生成達到抗菌作用，在畜牧業中用於預防和治療家禽呼吸（xī）道和腸道疾病。根據（jù）GB31650-2019國家標準中規定的動物（wù）源性食品中獸藥的最大殘留限量，豬肌肉中土黴素的最高殘留限（xiàn）量為200μg/kg，磺胺甲氧噠嗪為（wéi）100μg/kg,甲碸黴素為50μg/kg。動物（wù）源性食品樣（yàng）品提取前一定要進行預（yù）處理，對於動物（wù）材料要（yào）剔除結締組織和脂肪等非活性部分。固相萃取(SPE)是將樣品中分析（xī）物從絡（luò）合（hé）物基（jī）體中預濃縮，再進行定量分析的最常用的（de）方法。傳統固相萃取法的主要缺點之一（yī）是吸附劑(C8，C18等)的選擇（zé）性低，容易受到（dào）樣品相似特性的幹擾（rǎo）。四環素類抗生素殘留的（de）檢測方法包括理化檢測（cè）法、微（wēi）生物（wù）法、免疫分析法、化學（xué）發光法、分光光度法等。磺胺類藥（yào）物檢（jiǎn）測方法有:膠體金免疫層析技術法、酶聯免疫吸附法、高效液相色譜法、液相色譜－串聯（lián）質譜法等檢測方法。對於氯黴素類藥（yào）物殘留檢測用到（dào）的方（fāng）法主要是（shì）高效液相色譜法和液相色（sè）譜－質譜/質譜法（fǎ）。這些方法可以在一定程度上滿足檢測要求，但是存在一些如操作複雜，檢測費用昂（áng）貴，重複性差（chà），檢（jiǎn）測限高，有的甚至（zhì）會（huì）出現假陽性等問題。因此開發一種操作簡便，準確（què）度高，且（qiě）能滿足廣譜性（xìng）和高靈敏度的方法具有重要意義。本（běn）文參考國家標（biāo）準，並在此（cǐ）基礎上進行了改（gǎi）進，使用HLB固相萃取柱提取富（fù）集目標物，用乙腈（jīng）—磷酸二氫鉀溶液作為（wéi）流動相，采（cǎi）用高效液相色譜法檢測（cè）抗生素類藥物。結（jié）果表明，該方法操作簡便、靈敏度高、檢測限低，可以用於豬肌肉中抗生素類藥物殘留的檢測。

1 實驗（yàn）部分

1.1 儀（yí）器與設（shè）備

超聲波清洗儀(昆（kūn）山市超聲儀器（qì）公司（sī）);TG16型台式（shì）離心機(上海盧湘儀);ThermoU3000高效液相色譜儀(美國賽默飛世爾公司);雷磁PHS-25pH計(上海儀電科學儀器公司);RE-52AA旋轉蒸（zhēng）發儀（yí）(上海亞榮生化儀器廠);SPE12固相萃取儀、HLB固相萃取柱(30mg/3mL，上海本（běn）昂科學儀器公司)。

1.2 試劑和樣品

土黴素(OTC)、甲碸黴素(TAP)、磺胺甲氧噠嗪(SMP)標準品(純度99%，凱瑪生化公（gōng）司);乙腈(色（sè）譜純，湖北弗頓科學技（jì）術公司);甲醇、正己烷(色（sè）譜純，西隴科學股（gǔ）份（fèn）公司)。其它試劑均為分析純，實驗用水均為超純水。新鮮豬（zhū）肉樣品購自荊門市菜（cài）市場。

1.3 實驗（yàn）方法

1.3.1 樣品處理（lǐ）

購買的豬（zhū）肉樣去除脂肪和結締組織，放入絞肉機破碎處理，均質後的肌肉樣品，放入冰箱（xiāng）－20℃保存一個月，使用時將（jiāng）其解凍。樣品提取:稱取（qǔ）5g搗碎後的樣品置於50mL錐形（xíng）瓶中，加入20mL乙腈超聲提取15min，將得到的（de）混合物抽濾，收集濾（lǜ）液。向固體（tǐ）殘渣中再加入20mL乙腈超聲15min後抽濾（lǜ），合並濾液。濾液旋蒸至10mL，向（xiàng）濾液中加入20mL正（zhèng）己烷除脂，震蕩10min，靜置1h待分層後棄去上層正（zhèng）己烷相。然後（hòu）將溶液旋幹，再加（jiā）入（rù）10mL甲醇超聲溶解抗生素。樣品（pǐn）淨化富集:分別用5mL甲醇，5mL超純水活化HLB固相萃取柱，然後將樣品處理液通過固相萃取柱，接著用10mL蒸餾水、10mL5%甲醇溶液（yè）淋洗固相萃取柱（zhù），除去雜質。最後用（yòng）10mL甲醇洗脫抗（kàng）生素。將得到的洗（xǐ）脫液旋幹後加入流動相超聲定容至5mL，最後（hòu）經0.22μm濾膜過濾後進樣。

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