動物源性食品（pǐn）中青黴素類藥物殘（cán）留檢測

近幾十年來抗生素，尤其是β-內酰胺類抗生素，由於其在人類醫學和獸藥學上有效地預防和治療各種傳染性疾病而備（bèi）受關注。青黴素屬於β-內酰胺類（lèi）抗生（shēng）素，由於其藥效高、價格低廉、使用方便，已成為臨（lín）床上治療細菌感染最常用的抗生素，在畜（chù）牧獸醫水產養殖領域也得到了廣泛的應用。同時，抗生素（sù）殘留也成為國際貿易的壁壘。歐盟（méng）指令NO.2377/90/EEC對青黴素類抗生素在動物源性食品中的殘留進行了（le）嚴格限製。所以對動（dòng）物源性食品（pǐn）中（zhōng）此類抗生素殘留的有效監測已經成為保障食品安全的一個重要環節。為滿足殘留檢測的需要，建立一種動物源（yuán）性食（shí）品中青黴素類抗生素殘留的分析方法非常重要。

中國肉類食品綜合研究中心的馬燕（yàn）紅，王 妍（yán），李（lǐ）誌剛等人旨在建立一種（zhǒng）動物源性食品中青黴素G、苯唑西林、乙氧（yǎng）萘青黴素（sù）、雙氯青黴素4 種（zhǒng）青黴素類藥物的高效液（yè）相色譜檢測方法。采用乙腈-水（shuǐ）提取目標化合物，HLB固相萃取柱淨化，高效液相（xiàng）色譜法對（duì）不同基質中4 種青（qīng）黴素類藥（yào）物進行測定，並驗證了所建方（fāng）法的選擇性、準確性、穩定性和靈敏性（xìng）。

1、儀器條件的優化

本實驗在大量文獻和前期工作的基礎上，對比乙腈-水、乙腈-0.02 mol/L乙酸銨溶液、乙腈-0.02 mol/L磷酸二（èr）氫（qīng）鉀（jiǎ）溶液和乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶（róng）液作為流動相，標準物質出峰的（de）半峰寬、分離度、保留因子等參數情況（kuàng）。結果（guǒ）表明：采（cǎi）用乙腈（jīng）-水（shuǐ）為流（liú）動相進行實驗（yàn）時，溶劑峰嚴（yán）重拖尾，且化合物（wù）不出峰，原因可能是流動相中（zhōng）不含鹽，與固定相無保留（liú）；在流動相中加入鹽後，化合物與固定相作用，可以正常出峰，但（dàn）乙腈-0.02 mol/L乙酸（suān）銨溶液為流動相時，色譜峰的半峰寬大於乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液為流動相時的峰寬；加大鹽的濃度，峰形（xíng）變窄，變尖。但考（kǎo）慮到鹽濃度增大在色譜柱中易結晶，影響色譜柱壽命，本實驗選取乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液作為流動相。

2、提取條件的（de）選取

2.1 提取溶劑的選擇：用乙腈和乙腈-水（10∶1，V/V）作提取溶劑時，回收率均在90%左右，後者回收率略高，其他（tā）2 組回收率較低。可能是由於乙腈提（tí）取時（shí）沉澱蛋白完全（quán），易於離（lí）心分（fèn）離，提前加入水能先溶解目標化合（hé）物。故本實驗選取乙腈-水（10∶1，V/V）作為（wéi）提取溶劑。

2.2 SPE柱（zhù）的選擇：本實驗比較了這2 種SPE柱在相同條件下（xià）的回收率。加標量為50 μg/kg，3 mL甲醇、3 mL水活化，上（shàng）樣（yàng），水淋洗後抽幹，最後用2 mL甲醇＋2 mL乙腈洗脫，N2吹幹後乙腈複溶。HLB柱對目標化（huà）合物（wù）的回收率均高於（yú）C18柱。

2.3 SPE洗脫條件的優化：洗脫液為2 mL甲醇＋2 mL乙腈時，4 種化合物的回收（shōu）率明顯提高。當在活化和淋洗劑中加入堿性（xìng）磷酸緩衝鹽時，回（huí）收率達到了90%左右。可能是堿（jiǎn）性（xìng）磷酸（suān）鹽緩衝（chōng）液防止待測物降解（jiě）。最終確定SPE萃（cuì）取小柱的最佳條件為：選（xuǎn）取HLB萃取柱，采用方（fāng）案（àn）4的方式淨化。

3、方（fāng）法的驗證

3.1 標準曲線（xiàn）、檢出（chū）限和定量限結果：各目標化合物標準曲線的相關（guān）係數（shù）均大於0.999，顯示了良好的相關性。檢出限（xiàn）和定（dìng）量限采用空白樣品中添加青黴素類化合物的（de）方法，分別以信噪比不小於3和信噪比不小於（yú）10計算。各（gè）青黴素的檢出限為3 μg/kg，定量（liàng）限為10 μg/kg，可以滿（mǎn）足青黴（méi）素類化合物的定性及定量測定要求。

3.2 精密度（dù）測定結果：在空白（bái）豬肉樣品中進行精密度實驗（yàn），樣品添加不同（tóng）含量的標準溶液後，渦旋混勻，於室溫放置（zhì）10 min，使待測成分與樣品機體成分互相作用達到平衡（héng），做（zuò）6 次重複實驗，測（cè）定結果的相對標準偏差（chà）在10%以內。

3.3 回收率測定結果（guǒ）：在不同（tóng）的基質中，3 個水平的（de）回收（shōu）率在69.9%～100.3%範圍內。從精密度和回收率的結果可以得出，該方法有較高的準確性和可靠性。

實際樣品（pǐn）驗證：從（cóng）市場中選取5 種（zhǒng）基（jī）質進（jìn）行方法驗證，分別為豬肉、牛肉、羊肉、雞肉、草魚，目標化合物出峰處均無幹擾、未檢測出4 種青黴素（sù）類藥物殘留（liú）。

4、結論

本實驗以（yǐ）水（shuǐ）合氨苄青黴素作（zuò）為內標（biāo），建立一種高效液相色譜法（fǎ）檢測動物（wù）源性食（shí）品中的青黴素G鉀鹽、苯唑西林（lín）、乙（yǐ）氧萘青黴素、雙氯青黴素4 種青黴素類藥物殘留量的方法（fǎ）。采（cǎi）用直接進樣，無需衍生化，內標法定量提（tí）高了回（huí）收（shōu）率。該方法前處理簡單（dān）、快速（sù）、準確、靈敏，可以滿（mǎn）足實際檢測分析的需要。