【編者按】非洲豬瘟(ASF)是一種極具傳染性的病毒性疾病,給養豬業帶來了嚴峻的(de)挑戰。除了(le)對生豬直接造成威脅外,環境中的非洲豬瘟病毒核酸也可能成為潛在的傳(chuán)播源,增加疫情複發的風險。因此,清除環境中的病毒核酸顯得尤為重要。本文(wén)將跟隨作者深入探(tàn)討有效的方法和策略,幫助養殖者有效消毒和清理環境(jìng),確保豬場的生物安全,為養豬業的可持續發(fā)展提供堅實保障。 如(rú)果豬場外圍生物安全體係存在(zài)漏洞,環(huán)境、人員及用具則存在(zài)被非洲豬瘟病毒(dú)汙染的可能,因此需定期對可疑區域、人員及(jí)用具進行采樣,檢測非洲豬瘟病毒(dú)核酸,以此來(lái)評估(gū)豬場汙染程度並做出應(yīng)對措(cuò)施。目前檢測非洲豬瘟病毒核酸最常(cháng)用的方法是(shì)實時熒光定量(QPCR),用QPCR方法檢測出環境中存在(zài)非洲豬瘟(wēn)核酸,則表明該區域曾被非洲豬(zhū)瘟病毒汙染過,但並不能確定病毒是否具有感染力,因此(cǐ),即使被滅活後的非洲豬瘟病毒(dú),用QPCR的方法檢測核酸結果也依然(rán)會呈陽性(xìng)。驗證汙染區中病毒是否具有感染(rǎn)力隻有在專業實驗室中才能進行,而隨著QPCR方法、儀器和試劑工藝的成熟,在很多實驗室甚(shèn)至是豬場自建實驗室中都能完(wán)成驗證。因此,生產中養殖戶(hù)通常以非洲豬瘟核酸陰性來判斷環境中是否安全,而不是(shì)以汙染(rǎn)物是否具有感染力來(lái)判斷。 目前常見的清除核酸(suān)的(de)方法有消毒劑裂解、紫外線照射(shè)、高壓滅(miè)菌等,針對氣溶膠中的核酸汙染還能用環氧乙烷熏蒸、加強通風等(děng)方法清除核酸。試(shì)驗表明,氯(lǜ)消毒劑對新型冠狀病毒、MS2噬菌(jun1)體、豬藍耳病毒(dú)及豬偽(wěi)狂犬病毒(dú)等(děng)病毒核酸均有較好裂解作用。燒堿對(duì)RNA病毒核酸有較強的裂解(jiě)能力,但對DNA病毒核(hé)酸裂解(jiě)能力較弱。對(duì)非洲豬瘟病毒核酸裂解能力較強的消毒劑(jì)主要有二氯異(yì)氰尿酸鈉與三氯(lǜ)異氰尿酸鈉,其次是(shì)二氧化氯與(yǔ)過硫酸氫鉀,而戊二醛在(zài)高(gāo)濃(nóng)度下有一定裂解核酸作用,月苄三甲氯(lǜ)銨、過氧乙酸、癸甲溴銨、碘與酚等消毒劑裂解核酸能力較弱。本文從衝刷法和火焰灼燒法+氯製劑裂解法兩個方麵總結出易操作且能夠清除非洲豬(zhū)瘟病(bìng)毒核酸的有效方法(fǎ),供(gòng)廣大養殖戶參考。 1.衝刷法 1.1衝刷(shuā)法(fǎ)清(qīng)除核酸(suān)的原(yuán)理 非洲豬瘟病毒通常僅在環(huán)境、人員及物品表麵上粘附並(bìng)未侵入內部(bù),因此用水衝刷的方式很容易讓病毒從(cóng)表麵(miàn)脫離。除(chú)了用水衝刷,理論上(shàng)亦可用氣流來衝刷,但用氣流衝刷容易造成脫離的病毒飛(fēi)揚導致汙染擴散。用水衝刷時壓力過高易造成水霧飛濺,也可能(néng)導致汙染物擴散,因此,宜用低壓水衝刷方式來清除病(bìng)毒核酸。為減少汙染擴散的可能,衝刷前宜(yí)先用(yòng)消(xiāo)毒劑將非洲豬瘟病(bìng)毒滅活。 1.2衝刷法清除核酸的應用 用水衝刷不僅可以清除非洲豬瘟病毒,還可讓絕(jué)大多數(shù)其他(tā)汙染原隨水流衝走,因此,豬場員工淋浴更衣(yī)後(hòu)再進生產區(qū)可明(míng)顯降低豬群染病概率。若(ruò)人員身上QPCR檢測結果呈陽性,可全身用沐浴用品搓洗1遍,衝去泡沫後再搓洗1遍,之後用水衝全身10min,能衝刷(shuā)掉身上攜帶的病毒,使(shǐ)QPCR檢測結果呈陰性。 2.火焰灼燒法+氯製劑裂解法(fǎ) 2.1 火焰(yàn)灼燒法+氯製劑裂解法清除核酸的原理 使用此(cǐ)方法清(qīng)除核酸(suān),應先將物體(tǐ)表麵清(qīng)洗幹淨。核酸可用火(huǒ)焰(yàn)灼燒方法燒毀,也可以使用消毒劑(jì)破壞結(jié)構使其失活(huó),如次氯(lǜ)酸離子可(kě)以與核苷酸的含氮堿基(jī)反應破壞其(qí)結構,或(huò)者通過芬(fēn)頓(dùn)反應將DNA氧化,最終達到清除的目的。 2.21 火焰灼燒法+氯製劑裂(liè)解法清除核(hé)酸的(de)應(yīng)用 2.2.1火焰灼燒法 依(yī)次對清(qīng)洗幹淨的定位欄采樣,用QPCR檢測非洲(zhōu)豬瘟病毒核酸的結果有3處欄杆呈陽性,CT值在36~38。用液化氣噴槍火焰在這(zhè)3處欄杆表(biǎo)麵灼燒3s,冷卻後(hòu)再次采樣,檢測結果均轉(zhuǎn)為陰性。而表麵粗糙的水泥(ní)板漏縫,則(zé)需(xū)灼(zhuó)燒更久,QPCR檢測結果才會轉為陰(yīn)性。此法多(duō)用於清除被汙染的金屬製品、水泥地等可(kě)耐高(gāo)溫物體。
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