時間：2009-12-23 點（diǎn）擊： 次 來源：蜗牛视频app畜牧網（wǎng） 作者：陽（yáng）光畜牧網 - 小 + 大
| 瓊脂擴（kuò）散試驗，是根據沉澱試驗的原理,抗原和抗體可在瓊脂凝膠中擴散,並由近及遠形成濃度梯度，當抗原、抗體的特異（yì）性（xìng）互相對應時,它們在（zài）瓊脂基質中適（shì）合比（bǐ）例下相遇（yù）,便可相互結合,形成抗原-抗體的結合物,分子量相（xiàng）應增加,顆粒變大,故在瓊脂（zhī）凝膠中不再擴散（sàn）,在（zài）抗原、抗體比例較適合的位置上（shàng）形成白色可見的沉澱線,此（cǐ）種沉（chén）澱反應,稱為瓊（qióng）脂免（miǎn）疫擴散試驗，簡稱"瓊擴"。本（běn）法可用已（yǐ）知抗原測定（dìng）未知（zhī）抗體,反之亦然。在豬病的實驗室（shì）診斷中，常用於豬偽狂犬病的抗（kàng）體檢測（cè）,也曾有用此（cǐ）法檢查豬瘟、豬水皰病和豬痘等疾（jí）病的報道。現以檢測偽狂犬（quǎn）病的抗體為例，將其操作方法介紹如下。 (1)材料（liào） 偽狂犬（quǎn）病標準瓊（qióng）擴抗原,陽性血清,陰（yīn）性血清, 待檢血清(56℃滅能（néng）30分鍾),生（shēng）理鹽水（shuǐ）,打孔器（qì）,微量移（yí）液器,培養皿,瓊擴瓊脂(配製方法：含有（yǒu）0.1%石（shí）炭酸的磷酸緩衝鹽水,加（jiā）入1%的優質瓊脂,在沸水中融化均勻,若有雜質, 須用紗布過濾,然後分裝於鹽水瓶內,保存備用)。 (2)操作 ①澆瓊脂板和打孔 將已（yǐ）融化的瓊脂趁熱倒入平皿,製成3毫米厚的瓊脂板,待凝固後進行打孔。一組共7個孔,中間l孔,周圍6孔。用（yòng）打孔器打孔（kǒng）,剔出孔（kǒng）內的（de）瓊脂,然後將瓊脂板在酒精燈上來回過 2－3次,使瓊脂與玻板之間的空隙封閉。 ②向孔內加樣 中央孔加抗原,外周孔第1,5孔加陽性和陰性血清作對照,第2,3,4,6孔加待檢血清。將加完樣（yàng）的（de）瓊脂平皿合上（shàng）蓋子,置37℃恒溫（wēn）箱（xiāng）擴散（sàn）24－36個小時,然（rán）後（hòu）判定結果（guǒ）。 ③結果判定 首先檢查標準陽（yáng）性血清孔（kǒng）和抗原孔之間是否出（chū）現明顯的致密的白（bái）色沉澱線5的，而陰性孔則不出現,隻有在對照組出現正確（què）結果的（de）前題下,被（bèi）檢孔才可參照標準（zhǔn）判定。 ④注意事項（xiàng） 第一,瓊擴所用的（de）瓊脂必須是優質的瓊（qióng）脂（zhī）粉,若用普通的瓊脂條,應事先進行淨化精製。精製的簡易方法（fǎ）是：取（qǔ）條狀瓊脂（zhī）24克,加蒸餾水1 000毫升,在沸水中融化,趁熱（rè）倒入搪瓷盤中,待冷卻後切成1平方厘（lí）米大（dà）小（xiǎo）的瓊脂塊,用蒸餾水或無離子水浸泡2－3天,每天換水（shuǐ）4－5次，然後將處理好的瓊脂塊隔水融化,加入0.1%石炭（tàn）酸磷酸緩（huǎn）衝鹽水,配成1%瓊脂。 第二,製備瓊脂板應在水平台上進（jìn）行,防止產生厚薄不勻。板的厚度要求（qiú）一致(7.5厘米的平皿,用（yòng）15毫（háo）升（shēng）瓊脂液)。 澆製時（shí）防止產生氣泡（pào）。平皿澆製的瓊（qióng）脂板（bǎn）在4℃冰箱內可保存15天。 第三,打孔的孔徑、孔距（jù）力求（qiú）準（zhǔn）確、合適。 第四,加滴孔中的抗原和（hé）血清時,孔內必須加滿（mǎn）而又不（bú）能外溢。加樣時不能帶進小氣泡。 |
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