牛奶中青黴素殘留檢測方法

前    言

本（běn）標準按GB/T1.1—2000 《標準的結構和編寫規則》進行編製（zhì）

本（běn）標（biāo）準由四川省畜牧食品局提出並歸口

本標準由四川省質量技術（shù）監督局批準

本標準起草單位：四川省獸藥殘留監控中心、四川省獸藥監察所

本標準主要起草人：楊鬆沛、彭莉（lì）、嶽秀英、熊浩山、官豔麗、王海波、吳曉嵐

 牛奶中青黴素殘留檢（jiǎn）測方法--酶聯免疫吸附測定(ELISA)法

範圍

本標準規定了牛奶中青黴素殘留量檢測的製樣和酶聯免疫吸（xī）附測定法。

本（běn）標準適（shì）用於牛奶中青黴素的殘留量的（de）快速篩選檢測。對於可疑樣品需用確證法確認。

規範性引用文件

下列文件中的條款（kuǎn）通過本標準的引用而（ér）成為本標準的條款。凡是注（zhù）日期的引用文件，其隨後所有（yǒu）的修改單（不包括勘誤的內容）或修（xiū）訂版均不適用（yòng）於本標準，然而，鼓勵根據（jù）本（běn）標準達成協（xié）議的各（gè）方研究是否可使用（yòng）這些（xiē）文件的最新版本。凡是不注日期的引用（yòng）文件，其最新版本（běn）適用（yòng）於本標準。

GB/T 1.1-2000 標準化工作導則 第1部分：標準的結構和（hé）編寫規則 (ISO/IEC Directives, Part 3, 1997, Rules for the structure and drafting of International Standards, NEQ)

GB/T 6682-1992  分析（xī）實驗（yàn）室用（yòng）水規則和試驗方法

農牧發[2003]1號  獸藥殘留試驗技術規範（試行）

製樣

樣品的製（zhì）備

取適量新（xīn）鮮的空白（bái）或供試牛奶，渦旋混合使之均勻，密封。

樣品的保存

-20℃以下冰箱中（zhōng）貯存備用。

測定方法

方（fāng）法提要（yào）或原理

牛奶中殘留的青黴素用（yòng）PB緩衝液提取，酶聯免疫吸附（fù）測定（dìng）法測定,其基本原理是（shì）抗原抗體反應。酶標板的微孔包被有偶聯抗原，標樣或樣品中的青黴素與酶標記抗原（yuán）競爭青黴素特異（yì）性抗體。通過洗滌除（chú）去沒有與特異性抗體結合的酶標記抗原。加入底物液（yè），結合到板上的（de）酶標記（jì）物將（jiāng）底物轉化為有色產物。加（jiā）入終止液，在450nm處測定吸光度值（zhí），吸光度值與試樣中青黴素濃度呈反比。

試劑和材料

以下所用的試劑，除特別注明者外均為分析純試劑；水為符合GB/T 6682規定的二級水。  

正己烷

PB緩衝液的配製 稱取（qǔ）51.6gNa₂HPO₄.12H₂O和8.7gNaH₂PO₄.2H₂O，用1000mL水（shuǐ）溶解（pH=7.2）即可。

青黴素試劑盒（采用官方備案的試劑盒）

4.2.6.1  青黴素係列標準溶液  0mg/mL 、0.1mg/mL、0.3mg/ml、0.9mg/mL、2.7mg/mL、8.1mg/mL

4.2.6.2  酶標板  8條×12孔，包被有偶聯抗原

4.2.6.3  酶標記物

4.2.6.4  青黴素抗體

4.2.6.5  底物溶液A

4.2.6.6  底物（wù）溶液B

4.2.6.7  濃縮洗滌液 臨（lín）用（yòng）前用水稀釋二十倍作為洗滌液

4.2.6.8  終止溶液

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