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牛結節性皮膚病ELISA檢測試劑盒驗證試驗

時間:2020-07-29    點擊: 次    來(lái)源:蜗牛视频app畜牧網    作者:薛(xuē)文(wén) - 小 + 大

      摘(zhāi)要:2019年8月(yuè)12日,經國家外來動(dòng)物疫病研究中心檢測,確診新疆伊犁州發生牛結節性皮膚病疫情,這是新疆首次發(fā)現該病。疫情確(què)診後,對病牛所在縣及其(qí)相鄰縣全部牛隻進行緊(jǐn)急免疫(yì)山羊痘疫苗。為了了解免疫後抗體水平(píng),驗證檢測試劑盒特異性,選取3個規模化牛場(chǎng)及1個規模化羊場,采用雙抗(kàng)原夾心酶(méi)聯免疫法,對76份牛血清樣本和36份羊血清樣本進行了檢測。結果顯示,測試的雙抗原ELISA檢(jiǎn)測試劑盒,可以檢測到16份牛結節性皮膚病病(bìng)毒感染(rǎn)抗體和21份山羊(yáng)痘病毒免(miǎn)疫抗體,未能檢出山羊痘免疫牛血清(qīng)中相關抗體。
  2019年8月3日,新疆伊(yī)犁哈薩克(kè)自治州報(bào)告在(zài)伊犁察布查爾縣瓊(qióng)博(bó)拉鎮入戶排查時,發現部分牛養殖(zhí)戶有1-2頭發病,患牛皮膚出現廣泛性(xìng)結節(jiē)(疙瘩(dá))、流鼻涕、流涎、食欲減退及發燒等臨床(chuáng)症狀,初步診斷為疑似(sì)牛結節(jiē)性皮膚病(LSD)。疫(yì)情確診後,采用國家批準的山羊痘疫苗(按照山羊的5倍劑量),對病牛所在(zài)縣及其相鄰縣全部牛隻進行緊急免疫。為了(le)驗(yàn)證檢測試劑盒特異性,選取46份LSDV感(gǎn)染(rǎn)牛血清,66份免疫血清樣本(36份羊血(xuè)清,30份牛血清),采用雙抗原夾心酶聯免疫法對血清樣本進行了檢測,為做好LSD防控提供一(yī)些數據支撐。
  1 材料與方法
  1.1 分(fèn)組及樣品采集
  1.1.1 感染組(牛結節性皮膚病感染抗體檢測)。在伊犁(lí)州霍城縣某發病牛場采集感染LSDV牛血清24份,在伊犁州察(chá)縣某發病牛場采集感染LSDV牛血清22份。
  1.1.2 試驗羊組(山羊痘免疫抗體檢測)。選自新疆昌吉州奇台縣某規模羊場,選取整群綿(mián)羊36隻,采用皮內注(zhù)射進行山羊痘疫苗第1次免(miǎn)疫,疫苗免疫40天後采集血樣。
  1.1.3 試驗牛組(牛免疫(yì)山羊痘(dòu)抗體檢測)。選(xuǎn)自新疆伊犁州察(chá)縣1個(gè)鄉鎮規模化養殖場選取30頭,采用皮(pí)內注射進行山羊痘疫苗(按(àn)照山(shān)羊的5倍(bèi)劑量免疫(yì))第(dì)1次免疫,疫苗免疫(yì)30天後,采集血樣。
  1.2 疫苗及檢測試劑
  疫苗來源來(lái)自政府統一招標采購的山羊痘疫苗。
  診斷試(shì)劑 羊痘屬抗體檢測試劑盒購自法國ID.VET公司,生產批(pī)號F05。
  1.3 檢測方法(fǎ)
  采用雙抗原(yuán)夾心酶聯免疫法,以羊痘病毒純化抗原作為包被抗原,檢測牛、綿羊、山(shān)羊(yáng)和其它敏感物種血清中(zhōng)的羊痘(dòu)病(bìng)毒、牛結節性皮膚(fū)病病毒、綿羊痘病毒、山羊痘(dòu)病毒抗體。
  1.4 儀器(qì)設備
  全波長酶標儀(Thermo)、高速自動(dòng)化清洗酶標板(瑞士(shì)帝肯)、微量移液器(qì)等。
  2 結果(guǒ)
  2.1 感染(rǎn)組
  共檢測2個場點的46份牛血(xuè)清樣品,檢出抗體陽性16份。
  2.2 試驗羊組
  共(gòng)檢測1個場點的36份羊血清樣品,檢出抗體陽性21份。
  2.3 試驗牛組(zǔ)
  共檢測(cè)1個場點的(de)30份牛血清樣品,檢出抗體陽性0份。
  3 討論和(hé)建議
  此次牛結節性皮膚病疫情為新(xīn)疆首例。通過采取“免疫(yì)+改良捕殺”的防控策略,即在伊犁地區緊急免疫山羊痘疫苗(按照山羊的5倍劑量免(miǎn)疫),同時(shí)采取僅對發病牛進行捕殺的政策,限製動物移動。由於天氣轉冷蚊(wén)蟲等傳播媒介減少,LSD疫情(qíng)呈(chéng)明顯的季節性。該疫情已得(dé)到有效控製。通過入戶排查結合熒光(guāng)PCR試驗(yàn)檢測,未發現新增LSD病例。
  本次檢測(cè)用的雙抗(kàng)原ELISA檢測(cè)試劑盒,未能檢(jiǎn)出山羊(yáng)痘免疫牛隻血清中相(xiàng)關抗體。這可能是由於山羊痘疫苗為弱毒苗,主要是(shì)細胞介導,可在短時間內發生免疫作(zuò)用,但抗體產生的滴(dī)度水(shuǐ)平低。有報道顯示,首次(cì)免疫山羊痘活疫(yì)苗(miáo)產生的抗體滴度不均,14-21天達到抗體水平峰值,51天左右出現免疫空擋,且免疫(yì)後期抗(kàng)體滴度水平較低,這與疫苗種類、畜禽機體、飼養管理等影響較大。另一方麵,山羊痘僅(jǐn)免疫(yì)牛隻(zhī)一次,產生抗體的滴度低,尤其是對(duì)輕度和持續期較長的LSDV感染,使用ELISA方法檢測抗體水平來評價疫(yì)苗免疫效果不佳。此外,皮內操作困難,容易(yì)注入肌肉(ròu),造成免疫效果不確實或免疫失敗(bài)。
  根據檢測(cè)結(jié)果,可以檢測到牛結節性皮膚病病毒感染抗體和山(shān)羊痘(dòu)病毒免疫抗體(tǐ),現階段該試劑盒可作為牛結節性皮膚病發病(bìng)早期的血清學診斷方法和山羊痘免疫羊後抗體的檢測方法。建議首免21天後加強免疫(yì)一次,再進行抗體測(cè)定;同時采用中和試驗結合臨床觀察結果確認評價疫苗(miáo)免疫(yì)保護效果。

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