時間：2012-03-29 點擊（jī）： 次 來源：陽（yáng）光（guāng）畜牧網 作者：蜗牛视频app畜牧網 - 小 + 大
| 1.微生（shēng）物檢測法 微生物檢測法是應用較廣泛的方法，其測定原理（lǐ）是根據抗（kàng）生素對微生物的生理機能、代謝的抑製作用（yòng）,來定性或（huò）定量確定樣品中抗微生物藥物殘留，如紙片法（PD）、TTC法、拭子法（STOP）等。采用傳統的微生物檢測方法，缺點是：(1)時間長；(2)顯色狀態判（pàn）斷（duàn）通過肉眼辨別，易產生誤差，對微紅色者無法做出準確判斷；(3)操作（zuò）複（fù）雜。優點是費用低，一般實（shí）驗室都能操作。其中， 紙片法和（hé）TTC法是牛奶中藥物殘留檢測的兩種常用（yòng）的微生物檢測法。 1.1紙片法 紙片（piàn）法（fǎ），即PD法(Paper Disc)。常用（yòng）的紙片法有枯（kū）草杆菌紙片法和嗜（shì）熱脂肪杆（gǎn）菌紙片檢測法。這兩種方法主要用來檢測牛奶中的β－內酰胺類抗生素，其操作過程基本相同，而選用的菌種不同。枯（kū）草杆菌紙片法檢測的結（jié）果（guǒ）易出現假（jiǎ）陽性，為了確定陽性物質是否為（wéi）青黴（méi）素（或β－內酰胺類（lèi）），對加熱（rè）後的乳樣用青黴素酶（méi）處理，以滅（miè）活乳樣中的青黴素。然後再行檢測，檢測限可達0.01 IU/mL。而嗜熱脂肪杆菌紙片檢測法不僅用於（yú）檢測奶樣中β－內（nèi）酰胺類抗生素，並能暗示是否還存在其它抑菌物質，檢測（cè）限可達0.008 IU/mL以下（xià）。一般在4h內即可獲得結果。因此，在實踐中嗜熱脂肪杆菌紙片法比枯草杆（gǎn）菌紙片法應用（yòng）更為廣泛。此外，神保勝彥(1991)對紙片（piàn）法作了進一步研究和（hé）改進。改（gǎi）進（jìn）後的（de）紙片法不僅能夠確定抗生素的種類，而且提高（gāo）了檢出率和準確性，氯黴素最低（dī）檢出量0.01mg/kg，土黴素0.05mg/kg，鏈（liàn）黴素1mg/kg，紅黴（méi）素0.05mg/kg，青黴素0.0025mg/kg。 1.2 TTC法 TTC法，即氯化三苯基四氮唑法( tripheye tetrazolium chloride)，是目前我國（guó）食品衛生標準中規定的檢查牛乳中抗（kàng）生素（sù）殘留的檢（jiǎn）測方法（fǎ）(GB5409—85)。該法簡便、快速，無需特殊（shū）設備，3～4h可見（jiàn）報告（gào），很適合牧場（chǎng）、乳品廠及食品衛生檢測部門采用。檢測各種抗（kàng）生素（sù）所用的TTC法試驗的靈敏度（最低檢出量）分別為：青黴素0.004 U/mL，鏈黴素（sù）0.5 U/mL，慶大黴素0.4 U/mL，卡那（nà）黴素5 U/mL。 目前趨向研究更為靈敏、準確、簡便、快速（sù）的微生物檢測方法。如（rú）美國和加拿大，使用拭子法和（hé）牛的抗生素和磺胺實驗法（CAST）。此外，美（měi）國近年來補充的（de）一個新的實驗方法－快速抗生（shēng）素篩選法（FAST）。 盡管這些快速（sù）微生物檢測法有時會產生一些假陽性（xìng），但（dàn）在某種程度上是允許的；如產（chǎn）生這類情（qíng）況，可進一步做確證實驗（yàn）。 2.理化檢測法 理化檢測方法是利（lì）用抗生素分子中的（de）基團（tuán）所具有的特殊反應或性質來測定（dìng）其含量（liàng），如高效液相色（sè）譜法、氣相色譜法、質譜（pǔ）法、聯用技術等等，能進（jìn）行定性、定量和藥物鑒定，敏感性較高，但（dàn）有的檢測程序較複雜，有的檢測費用較高。在牛奶（nǎi）中抗生（shēng）素殘留檢測方麵，最常用的理（lǐ）化檢測方法是（shì）高效（xiào）液相色譜和聯用技術。 2.1高效液相色譜 高效液相色譜(HPLC)是目前廣泛應用的一種理化檢測方法，它引入了氣（qì）相色譜理論，在技術上采用了高（gāo）壓泵，高效（xiào）固定相（xiàng）和（hé）高靈敏度檢測器，實現了分離速度快、效率高（gāo）和操作自動化。幾乎所有的化合物包括高極性／離子型待測物和大分（fèn）子物質，均可用HPLC進（jìn）行（háng）測定。HPLC的（de）分離機製（zhì）與常規柱色譜相同，但填料更加精細（xì）(ф 5～10μm)，需高壓泵推動，柱（zhù）效高(105塔板／m)，速（sù）度快，靈敏度與GC相近。與GC相比，HPLC流動相參與（yǔ）分離機製，其組（zǔ）成（chéng）、比例和（hé）pH值等可靈活調節（jiē），如離子對色譜、膠束（shù）色譜、手性分離色譜等，使許多極難分離的待測物得以分析。反相HPLC發展最快，目前已成為大多數（shù）抗生素殘留的常規分析方法（fǎ）。主要原因是：(1)化學鍵（jiàn）合固定相(C18或（huò）C8)性質穩定，不淋失；(2)使用水、甲醇或乙腈等水溶（róng）性有機溶劑作流動相，不幹擾（rǎo）紫外檢測，成本低；(3)樣品中（zhōng）極性雜質先流出，隻需待測物出峰後即可重複進（jìn）樣，分析速度快。 最常用的檢測方式為（wéi）濃度型的紫外檢測器和熒光檢測器。紫外檢測器(UVD)最普及，其次是熒光檢測器和電化學檢測器(EChD)。由於（yú）奶樣中藥物殘留量少，背（bèi）景幹擾往往很嚴重，因此一般都（dōu）通過柱前衍生反應來提高紫外檢測器檢測殘（cán）留的靈敏（mǐn）度。彭莉等報道了用（yòng）高效液相色譜法（HPLC）檢測（cè）牛奶中氯黴素的殘留（liú）量（liàng），采用乙酸（suān）乙酯提取牛（niú）奶中殘（cán）留的（de）氯黴素，用紫外（wài）檢測器（qì）在278nm檢測樣品。平均加收（shōu）率94.8％，變異係數< 12.0％。此方法樣品前處理簡（jiǎn）單、回收率高、實用性強、檢驗靈敏度高、重現（xiàn）性好、檢測數據準確可靠，可作為牛奶中氯黴素殘留檢（jiǎn）測的確證方法。由於（yú）大部分抗生素（sù）在高於230nm的光（guāng）譜區無吸收，而在低於230nm的紫外區許（xǔ）多樣本基質和流動相產生幹擾，需衍生化後測定，限製了紫外檢測（cè）器的應用。但是，大部分抗生素是手性分子，因此旋光檢測器有很大發展潛力。旋（xuán）光檢測有以下特點：(1)選擇性高，樣（yàng）本僅需簡單提取即可；(2)靈敏度高（gāo），利用He－He激光作光源，靈敏度可達5～10uα水平；(3)可（kě）同時得（dé）到流出組分的（de）比旋度[α]，用以定性。目前，該方法已用於紅黴素、慶大（dà）黴素、羧苄青黴素和吩羧青黴素殘留的測定。 此外，光二（èr）極管陣列檢測器(DAD)是近10年來HPLC最重要的（de）突破。DAD可同時接收整個光譜區的信息，在（zài）色譜（pǔ）峰流出同時能進行（háng）每個瞬間的動態光譜掃描並快速采集信（xìn）號，經計算機處理後得到色（sè）譜—光譜的三維圖（tú）譜，信息量大大增加。一（yī）次進樣可得到每個組（zǔ）分峰的定量、定性和純度信息，靈敏度亦明顯提高。 |
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