免疫（yì）酶技術是根據抗原與抗（kàng）體特異性結合的功能,以酶作標記物,利用酶（méi）對底物（wù）具有高效催（cuī）化（huà）作用的原理而設計的,它既可用於（yú）抗原（yuán）的診斷,也可進行血清抗體的（de）檢測。
本試驗（yàn）是通過化學方法將酶與抗體（tǐ）(或抗原)結合起來, 標記後的抗體(或抗原)仍然保持與相應抗（kàng）原(或（huò）抗體（tǐ）)相結合的免疫學活（huó）性。例如,酶抗體與相應抗原結合後,形成酶（méi）標抗體-抗原複合（hé）物。複合物中的酶在遇到相應的底物時,催化底物分解、氧化而生成有色物質,有色產物的出現,客觀地反映了酶的存在,根（gēn）據有色產（chǎn）物的有無（wú）及其濃度,即可間（jiān）接推斷被檢抗原或抗體是否存在及其數量,達到定性和定量的目的。
免疫酶（méi）技術已經廣泛地用於傳染（rǎn）性疾病的診斷,血清流行病學（xué）調（diào）查和抗體水平的評價（jià）,微生物抗原的檢測及其在感（gǎn）染細胞內的定位。
目前在獸醫防（fáng）治的研究和實踐中,對於豬（zhū）瘟、偽狂犬病、 繁殖與呼吸綜合征、流（liú）行（háng）性（xìng）腹瀉、旋毛蟲病、豬氣喘病等疾病, 均采用免（miǎn）疫酶（méi）技術進行病原診（zhěn）斷，抗體檢測和血清（qīng）學流行病（bìng）調查（chá）,並且已成為規模化豬場化驗室工（gōng）作的一項重要內容（róng）。
利用免疫酶（méi）技術測定抗原或抗體的方法很多，下麵僅簡要介紹兩種適合豬場使用的免疫酶技術。
(1) 斑點酶聯免疫吸附試驗(Dot-ELISA)
①材料 硝酸纖維濾膜(孔徑0.45微米),0.01摩（mó）/升、 pH值7,2的磷酸鹽緩衝鹽水,封閉液(磷酸鹽緩衝（chōng）鹽水加入 10%馬血清（qīng）或0.1%明膠),30%雙氧水(H2O2),3,3′-二氨基聯苯胺(DAB)抗原液,陰性對照,待檢液,待檢血清,陽性血清及陰性血清,酶標免抗豬免疫球蛋白G(IgG),0.05摩（mó）/升三羥甲氨基甲烷-鹽（yán）酸緩衝液,洗滌液(磷酸鹽緩衝鹽水（shuǐ）加入 0.05%吐溫-20)。
②操作
檢測抗原
1)硝（xiāo）酸纖維濾膜(NCM)的處理：在濾膜上劃6毫米×6毫米的方格,在方格中央用蘸水筆尖的圓尾末端壓（yā）成圓形痕跡。置於蒸餾水中浸泡10分（fèn）鍾,取出後晾幹備用。
2)點樣：取1微升待檢液在硝酸纖維濾膜圓圈內點樣,同時設立陽性（xìng）與陰性（xìng）對（duì）照,自（zì）然幹燥或置37℃溫箱中幹燥（zào）。
3)封閉（bì）：將硝酸（suān）纖維濾膜置於封閉液中,37℃30分鍾, 用洗滌液洗滌1次,約3分鍾。
4)加工作濃度的豬陽性血清,將（jiāng）硝酸（suān）纖維（wéi）濾（lǜ）膜置於豬陽性血清（qīng）中,37℃作用1小時,取出（chū）用洗滌液洗滌3次,每（měi）次3 分鍾。
5)加酶標兔抗豬免疫球蛋白G,37℃作用1小時,然後洗（xǐ）滌3-4次,每次3分鍾。
6)加底物溶液(0.05摩/升三羥甲氨基甲烷（wán）-鹽酸緩衝液 100毫升,加3,3′-二氨基聯苯胺40毫克,30%雙氧水（shuǐ）50微（wēi）升（shēng）),作用5－20分鍾（zhōng）。
7)終止顯色,將硝酸纖維濾膜置於蒸餾水中衝洗（xǐ）2－3分鍾
8)自然幹燥,或37℃下（xià）幹燥。
9)判定標準：
"一" 不呈現（xiàn）斑點,與陰性對照相同。
"+" 斑點較弱或點（diǎn）內（nèi）有不均質的棕色點。
"++" 斑點淺棕色,對比度清晰。
"+++" 介於++和（hé）++++兩者之間。
"++++" 斑點深棕色,背景（jǐng）白色。
出現陽性反應的血清最高（gāo）稀釋（shì）度為該血清的Dot- ELISA效價。
10)注意事項：試驗（yàn）中的點樣抗原、血清及酶標抗體的（de）稀釋度應根據預（yù）備試驗確定；試驗中（zhōng）應使（shǐ）用不溶性供氫體,如（rú） 3,3′-二氨基聯苯胺,4-氯-1-萘酚等（děng）,不能使用（yòng）可溶性供氫體； 根據試驗的目的要求,確定檢測抗原或抗體；封閉液可使用異種動物血清（qīng）、牛血清白蛋白(BSA)或（huò）明（míng）膠溶液等進行封閉,根據預備試驗選（xuǎn）擇最佳封閉條件。
檢測抗體
1)硝酸纖維濾膜的處理（lǐ）,同檢測抗原。
2)點樣：取（qǔ）己知抗原液點（diǎn）樣,自然晾幹或37℃幹燥。
3)封閉,同（tóng）檢測抗原。
4)將點樣後的硝酸纖維濾膜（mó）按點樣格子剪（jiǎn）成小塊（kuài）,置入係列稀釋的待（dài）檢血清（qīng）(1：10,1：50,1：100,1 ：200,1 ：400, 1：800,1：1600,1：3200,1：6400,1：12800)中,同時設立陽性和陰性血清對照,37℃作用1小時,然後用洗滌液洗滌3次,每次3分鍾。
5)以下均同檢測抗（kàng）原6),7),8),9),10)項操作。
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