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凝集試驗的種類和方法

時間(jiān):2009-12-23    點擊: 次    來源:陽(yáng)光畜(chù)牧網    作(zuò)者:佚名 - 小 + 大

      凝集試驗的(de)原理是:顆粒抗原(紅細胞、細(xì)菌、病毒等)與含有相應(yīng)抗體的血清混合,在電解(jiě)質的參與下, 則能發生特異(yì)性結合,形成抗原抗體複合物,這種複合物呈均勻狀態懸浮於液體中,這時肉眼(yǎn)是看不見的,當抗原抗體複合物在一定濃度的電(diàn)解質作用下,複合物表麵(miàn)的電荷大部分被消除,失去了互相排斥的(de)作用,複合物之間(jiān)互相吸引(yǐn),凝集成團,即出(chū)現肉眼可見的凝集現象。作用於凝集反應的抗原,稱為凝(níng)集原,與之相(xiàng)結合的抗體,稱(chēng)為凝集素。
  凝集反應按其原(yuán)理可分為直接凝集反(fǎn)應和間接凝(níng)集反應兩類。用於豬病診斷的(de)常用操(cāo)作方法有以下幾種。
  (1)全血平板凝集試驗
     本試驗在實踐中主(zhǔ)要用於細菌性疾(jí)病的抗體檢測(cè)和抗(kàng)原(經(jīng)分離培養後)的鑒定。現舉例用已知豬丹毒抗原(丹毒杆菌的純培養液)測定被檢豬血清(qīng)中的抗體。其(qí)操作步驟如下(xià):
  ①材料 豬丹毒凝集抗原,玻片,9號針頭,酒精棉球,酒精燈,鉛耳(取(qǔ)血環)等。
  ②操作 用鉑耳取已知抗原1滴(dī),置於玻片上。用酒精棉球擦拭針(zhēn)頭,鉑耳在酒精燈上(shàng)灼燒消毒。用針頭刺破被檢豬的耳靜脈(mò),以鉑耳取血與(yǔ)玻片上的抗原等量混合,在2-3分鍾內觀察結果。
  ③結果判定 出現顆粒狀的凝集,為陽性反(fǎn)應。否則為陰(yīn)性。
  (2)試管凝集試驗
   試管凝集試驗是一種定量法,用於測定被檢血清或其他體(tǐ)液中有否某種抗體及其效價(jià),可作臨床的輔助診斷,或(huò)用於流行病學監測。在豬場中,本法常用於豬布氏杆菌病的診斷(duàn)。
  ①材料 布(bù)氏(shì)杆菌病試管凝(níng)集抗原(1:20倍稀釋),布氏(shì)杆菌病(bìng)陽性(xìng)血清、陰性血(xuè)清(1:25倍稀釋),稀釋液(0.5% 石(shí)炭酸生理鹽水),滅菌(jun1)小試管,1毫升吸管(guǎn),試管架,待檢血清等(děng)。
  ②操作 取試管7支置於試管架上,設陽性和陰性血清及抗原對照各1支,測定管4支,以後每增加(jiā)一個樣品,隻需增加4支測定管。
  按表(biǎo)2示意稀(xī)釋(shì)血清(qīng),加抗原,完成後(hòu)每支管內應含 1毫升液體。
  加入抗原後,將試管充分(fèn)振蕩,置37℃溫箱反應(yīng)24小時後,判定結果。
  ③判定標準(zhǔn)
  "一" 液體均勻混濁,管底無凝(níng)集物,不凝集。
  "+" 液體透明度較差,管底有少量凝集物,為(wéi)25%凝集。
  "++" 液體中等混濁,管底有中(zhōng)等(děng)量(liàng)的傘狀沉澱,50%菌體凝集。
  "+++" 液(yè)體幾乎透(tòu)明,管底有明顯傘狀沉澱,75%菌體凝集。
  "++++" 液體完全透明(míng),管底出現大片的傘狀沉澱,100% 菌體(tǐ)凝集。
  結果判定:以出現50%菌體凝集的血清最高稀釋度為該血清的凝集價。在檢測豬布氏杆菌病時,血清凝集(jí)價在1:50以上時,可判為陽性反應,若凝集價(jià)為1:25則為可疑(需複試驗1次)。如豬群(qún)中基本無陽性(xìng)反應,則凝集價1:25也可判為陰性。

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