時間：2009-12-12 點擊： 次 來源：蜗牛视频app畜牧網 作者：蜗牛视频app畜牧網 - 小 + 大
| 血凝抑製試驗(HI)，常（cháng）用於鑒定從禽（qín）類中分離到具有凝集紅細胞特性的病毒以及檢測疫苗免疫後或病毒感染後抗（kàng）體水平的高低。由（yóu）於特異性好、能進行大量樣本的分析、節（jiē）省試劑和易於操作等優點，對實際生產中禽流（liú）感病毒亞型鑒定、流感疫苗質量控製和（hé）抗體（tǐ）監測等方麵有著廣泛的應用。但是實際操（cāo）作中HI試驗受很多因素的影響。有（yǒu）些（xiē）因素甚至能嚴重影響實驗（yàn）結（jié）果（guǒ）的準確性（xìng）。筆者多年從事禽（qín）病的檢測工作，現將多年來總結的經驗及試驗中遇到的（de）問題結合一些研（yán）究資料，總結（jié）分析如（rú）下，以供同行參考。 1影響血凝抑製試驗的因素 1.1抗原濃度對HI試驗值的影（yǐng）響 按照農（nóng）業（yè）部的標（biāo）準檢測方法，檢（jiǎn）測用的抗原稀釋為四（sì）個單位後還需做一次回（huí）歸（guī）實驗，即檢測四個單位的抗原是否準確，但是生產中這一步經常被省略。事（shì）實上隨著抗原濃度的增加，HI滴度逐漸下降，每增加1倍濃度，滴度下降0.9~1.1log2。 1.2不（bú）同濃度的（de）紅血球對HI效價的影響 選用0.25%、0.5%和1%三個（gè）濃度（dù）的紅血球做比較試驗（yàn），結果這3個濃度的紅血球測得同一份血清HI滴度分別為7.74log2，8.7log2和9.6log2。即紅細胞濃度（dù）從0.25%~0.5%、0.5%~0.1%，每增加一倍，血凝（níng）（HA）滴度平均下降0.7log2~1.5log2、HI滴度平均上升0.7log2~0.9log2。 1.3溫度對HI試（shì）驗值的影響 溫度對HI試（shì）驗值的影（yǐng）響比較大，呈正相（xiàng）關，從4℃~37℃，HI滴（dī）度平均上升（shēng）2.3 log2，約每提高5℃平均上升0.35 log2。室溫如（rú）低於（yú）4 ℃，紅細胞（bāo）會發生自凝。同時溫度影響實驗結果出現的快慢，一般37℃結果出現最快，隨著（zhe）溫（wēn）度的升高，會出現反（fǎn）應物解離和紅細胞溶血現象。 1.4抗原與抗體作用時間對HI試驗值的（de）影響 HI滴度（dù）隨作用時間的延長而升高，溫度（dù）低，遞增慢，達到HI最高值的所（suǒ）需時間長；溫度高，遞增快（kuài），達到最（zuì）高值所需時間短。但在高溫下，凝集圖形洗脫加快，容易造成觀察上的失誤，一般在常溫（wēn）18℃~20℃，作用30分鍾為標準（zhǔn）。 1.5稀釋液PH值對HI試（shì）驗值的（de）影響 用PH值為5.0~8.0的係列磷酸鹽緩衝液（yè），分別作（zuò）HA和HI試驗時的稀釋液。有實驗結果表明，稀（xī）釋液PH值5.8以下時，紅細胞會（huì）發生（shēng）自凝；PH值7.8以上（shàng）時，圖形洗脫加快，易造成觀察誤差，以PH7.0時，紅細胞沉降最充分，圖形最清晰，HA值最（zuì）小，HI值最大。 1.6紅細胞的來源對HI試驗值（zhí）的影響 有的雞紅細胞有自凝現象，故標準采樣應采4隻雞（jī）的血液混合，製成紅細胞，減少（shǎo）自凝現象的幹（gàn）擾。要采非免疫（yì）雞的血液，若是免疫過的雞血，要充分洗（xǐ）去血清。 1.7判（pàn）定時間對HI試驗值（zhí）的影響 加紅細胞後，判定時間與抗原的洗脫快慢及反應溫度（dù）有關。用濃縮抗原做（zuò）HI試驗，室溫（wēn）在15℃~37℃時，判定時間從15分鍾~1小時，結果判（pàn）定時間對HI試驗值的影響很小，但需注意必須是濃（nóng）縮抗原。如果用疫苗如（rú）新城疫弱毒苗做抗原，則影響較大（dà），時（shí）間長了或短了都不行（háng）。 1.8微量反（fǎn）應板處理的影響 微量反應板V型（xíng）孔內壁應光滑，不（bú）能用試（shì）管刷等來刷洗V型孔，使用（yòng）過的反應板（bǎn）用硫酸與（yǔ）重鉻酸鉀配置（zhì）的洗液浸泡或用（yòng）3%的鹽酸浸泡，衝洗後需過（guò）蒸餾（liú）水然後烘幹。不潔（jié）淨的反應板會造成紅細（xì）胞的（de）非特異性凝集，影響結果的判定。 2常見問題的分析 2.1抗原的問題 由（yóu）於禽流感病毒變異較快，所以在血凝抑製試驗中經常（cháng）會（huì）出現不同廠家生產的相同亞型的禽（qín）流感抗原所測同一（yī）血清的血凝抑製價不同，禽流感亞型病毒株按其血凝抑製實驗所表現的親和力不同（tóng）而分為三種類（lèi）型（xíng）：對（duì）本株和異株免疫（yì）血清均呈較高效價的為“R”型、對本株效價高對異株效價低的為（wéi）“P”型（xíng）和對本株及異株均低的為“Q”型。由此可見養戶（hù）使用一種疫（yì）苗免（miǎn）疫用另一廠家的抗原檢測，這就是我們所說的“P”型，即抗原型的差異。如果在試驗中出現型的差異所測結果會相差2~3個滴度，所以在血凝抑製（zhì）試驗操作時，挑選親和型毒株作為測定（dìng）抗原較好，這樣（yàng）會提高診斷的靈敏度（dù）。也就是說使用某一廠家的疫苗最好用此廠家（jiā）提供的抗原做檢測。 2.2紅細胞來源的問題 在禽流感的HI中，會發現用雞（jī）的紅細胞懸液來檢測雞禽流感H5的HI抗（kàng）體時，沒有出現非特異性的凝集反應；而（ér）用雞的紅細胞懸液來檢測鴨（yā）、鵝、鴿的禽流感（gǎn）H5的HI，特別是鴨、鵝非特異性的凝集反應明顯。經（jīng）查資（zī）料，禽血清中都有低的或（huò）無法檢（jiǎn）測到的非（fēi）特異因子特別是水禽血清對雞紅細胞（bāo）可能產生非特異性的（de）凝集。若消除非特異性現（xiàn）象，對血清（qīng）的處理非常麻煩，不適合在大生產中推廣。經由一些試驗證明，用雞、鴨、鵝（é）、鴿的（de）紅細胞懸液分別來檢測雞、鴨、鵝、鴿的禽流感H5的HI抗體時非特異凝集作用消除了。因此，在以（yǐ）HI試驗檢測家禽的禽流感抗體的試驗中應使用同種非免疫（yì）家禽的紅（hóng）細（xì）胞懸液。 總之，在生產（chǎn）實踐中應認（rèn）真細致，綜（zōng）合分析確保檢測的準確性，以便有利指導生產。 |
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