副豬嗜血杆菌與豬鏈球菌（jun1）混合感染案例分析（圖）

1、發病情況及（jí）臨床症（zhèng）狀（zhuàng）

江西某豬場（chǎng）仔豬陸續出（chū）現行動困難、跛行、蹄不（bú）著地（dì）等症狀，仔豬四肢關（guān）節出現（xiàn）不同程度的腫大，觸診有波動感，有的豬的關節按（àn）壓時有摩（mó）擦感，用力按壓豬有疼痛感。剖檢發現心包有積液，肺髒有部（bù）分淤血。劃開後肢關節有大量的黃色（sè）膿性（xìng）滲出物，關節腔內有黃色積液（yè），關節（jiē）囊、滑膜嚴重增生，關節腔內出血充血嚴重，且有炎性增生（圖1）。

2、實（shí）驗室診斷

2.1 材料

2.1.1 血樣采集

對2頭發病仔豬進行前腔靜脈采血5 mL，析出血清，用於血清學診斷（duàn）

2.1.2 仔豬剖檢

對2頭發病仔豬進行病理剖檢，分（fèn）別剪取出肺髒、腹股溝淋巴結、脾髒等病變組（zǔ）織並收集心包液、關節液及關節膿性滲出物，用於細菌的分離培養（yǎng）和PCR鑒定

2.1.3 培養基及試（shì）劑

大豆（dòu）酪蛋白瓊脂培養基（TSA，廣東環凱微（wēi）生物科（kē）技有限公司）、煙（yān）酰胺腺嘌呤（lìng）二核苷酸（NAD）、胎牛血清、血平板、革蘭氏染色液、2×Taq PCR StarMix with Loading Dye（GenStar）、病（bìng）毒DNA/RNA提取（qǔ）試劑盒（hé）（Magen）、RT-PCR試劑（Takara）

2.1.4 藥（yào）敏試驗材料

環丙（bǐng）沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、卡那黴素、替米考星、磺胺甲惡唑、大觀黴素、氨苄西林鏈黴素、新黴素（sù）、慶大黴素、阿（ā）莫西（xī）林、氟苯尼考、頭孢（bāo）曲（qǔ）鬆、頭孢拉定、萬古黴（méi）素、四環素共17種藥敏試紙均購於OXOID公司

2.2 方法

2.2.1 PCR鑒定

2.2.1.1 引物合成

參考NCBI上豬繁殖與呼吸（xī）綜合征病毒、豬鏈球菌、副豬嗜血杆（gǎn）菌特異蛋白的基因序（xù）列，用Primer 5.0 軟件（jiàn）分別設計了它（tā）們具有高特異性和敏感性的引物，對分離到的疑（yí）似豬藍耳病毒、鏈（liàn）球（qiú）菌和副豬嗜血杆（gǎn）菌（jun1）進行PCR鑒定，引物序列及擴增片段長度，由蘇州泓迅生物科技（jì）有限公（gōng）司合成（表1）。

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